2
# File created on 02 Nov 2011
3
from __future__ import division
5
__author__ = "Greg Caporaso"
6
__copyright__ = "Copyright 2011, The QIIME project"
7
__credits__ = ["Greg Caporaso"]
10
__maintainer__ = "Greg Caporaso"
11
__email__ = "gregcaporaso@gmail.com"
12
__status__ = "Release"
15
from os import makedirs, system, chdir, getcwd
16
from os.path import exists
17
from shutil import rmtree
18
from numpy import array
19
from cogent import LoadTree, LoadSeqs
20
from cogent.util.unit_test import TestCase, main
21
from cogent.app.util import get_tmp_filename
22
from cogent.util.misc import remove_files
23
from qiime.util import load_qiime_config, count_seqs
24
from qiime.workflow import (call_commands_serially,no_status_updates)
25
from qiime.parse import (parse_qiime_parameters,
27
from qiime.pick_subsampled_reference_otus_through_otu_table import (
28
pick_subsampled_open_referenence_otus,
29
iterative_pick_subsampled_open_referenence_otus,
30
final_repset_from_iteration_repsets)
31
from biom.parse import parse_biom_table
33
## The test case timing code included in this file is adapted from
34
## recipes provided at:
35
## http://code.activestate.com/recipes/534115-function-timeout/
36
## http://stackoverflow.com/questions/492519/timeout-on-a-python-function-call
37
class TimeExceededError(Exception):
41
allowed_seconds_per_test = 500
43
def timeout(signum, frame):
44
raise TimeExceededError,\
45
"Test failed to run in allowed time (%d seconds)."\
46
% allowed_seconds_per_test
49
class PickSubsampledReferenceOtusThroughOtuTableTests(TestCase):
55
self.start_dir = getcwd()
56
self.qiime_config = load_qiime_config()
57
self.dirs_to_remove = []
58
self.files_to_remove = []
60
self.tmp_dir = self.qiime_config['temp_dir'] or '/tmp/'
61
if not exists(self.tmp_dir):
62
makedirs(self.tmp_dir)
63
# if test creates the temp dir, also remove it
64
self.dirs_to_remove.append(self.tmp_dir)
66
self.wf_out = get_tmp_filename(tmp_dir=self.tmp_dir,
67
prefix='qiime_wf_out',suffix='',result_constructor=str)
68
self.dirs_to_remove.append(self.wf_out)
70
self.fasting_seqs_fp1 = get_tmp_filename(tmp_dir=self.tmp_dir,
71
prefix='qiime_wf_seqs',suffix='.fasta')
72
fasting_seqs_f = open(self.fasting_seqs_fp1,'w')
73
fasting_seqs_f.write(fasting_seqs_subset)
74
fasting_seqs_f.close()
75
self.files_to_remove.append(self.fasting_seqs_fp1)
77
self.pick_ref_otus_refseqs2 = get_tmp_filename(
78
tmp_dir=self.tmp_dir,prefix='ref_otus_wf',suffix='.fna')
79
f = open(self.pick_ref_otus_refseqs2,'w')
80
f.write(pick_ref_otus_refseqs2)
82
self.files_to_remove.append(self.pick_ref_otus_refseqs2)
84
self.fasting_seqs_fp2 = get_tmp_filename(tmp_dir=self.tmp_dir,
85
prefix='qiime_wf_seqs',suffix='.fasta')
86
fasting_seqs_f = open(self.fasting_seqs_fp2,'w')
87
fasting_seqs_f.write(subsample_otus_seqs)
88
fasting_seqs_f.close()
89
self.files_to_remove.append(self.fasting_seqs_fp2)
91
signal.signal(signal.SIGALRM, timeout)
92
# set the 'alarm' to go off in allowed_seconds seconds
93
signal.alarm(allowed_seconds_per_test)
99
# change back to the start dir - some workflows change directory
100
chdir(self.start_dir)
101
remove_files(self.files_to_remove)
102
# remove directories last, so we don't get errors
103
# trying to remove files which may be in the directories
104
for d in self.dirs_to_remove:
108
def test_final_repset_from_iteration_repsets(self):
109
""" final_repset_from_iteration_repsets functions as expected """
115
ACCGTT""".split('\n')
122
TACCGTT""".split('\n')
131
exp = [("o1","ACCGT"), ("o2","AGG"), ("o3","ACCGTT"),
132
("o4","TACCGT"), ("o5","TAGG"), ("o6","TACCGTT")]
133
actual = list(final_repset_from_iteration_repsets([repset1,repset2]))
134
self.assertEqual(actual,exp)
136
exp = [("o1","ACCGT"), ("o2","AGG"), ("o3","ACCGTT"),
137
("o4","TACCGT"), ("o5","TAGG"), ("o6","TACCGTT"),('o7','AAAA')]
138
actual = list(final_repset_from_iteration_repsets([repset1,repset2,repset3]))
139
self.assertEqual(actual,exp)
142
def test_iterative_pick_subsampled_open_referenence_otus_no_prefilter(self):
143
"""pick_subsampled_open_referenence_otus functions as expected without prefilter
145
iterative_pick_subsampled_open_referenence_otus(
146
input_fps=[self.fasting_seqs_fp1,self.fasting_seqs_fp2],
147
refseqs_fp=self.pick_ref_otus_refseqs2,
148
output_dir=self.wf_out,
149
percent_subsample=0.5,
150
new_ref_set_id='wf.test.otu',
151
command_handler=call_commands_serially,
152
params=parse_qiime_parameters([]),
153
qiime_config=self.qiime_config,
154
prefilter_percent_id=None,
155
step1_otu_map_fp=None,
156
step1_failures_fasta_fp=None,
158
suppress_step4=False,
160
status_update_callback=no_status_updates)
163
final_otu_map_fp = '%s/%d/final_otu_map.txt' % (self.wf_out,i)
164
final_failure_fp = '%s/%d/final_failures.txt' % (self.wf_out,i)
165
self.assertTrue(exists(final_otu_map_fp),"Final OTU map doesn't exist")
166
# No final failures file should be created
167
self.assertFalse(exists(final_failure_fp),\
168
"Final failures file shouldn't exist, but it does")
170
otu_table_fp = '%s/%d/otu_table_mc2.biom' % (self.wf_out,i)
171
self.assertTrue(exists(otu_table_fp),"OTU table doesn't exist.")
173
repset_fp = '%s/%d/rep_set.fna' % (self.wf_out,i)
174
self.assertTrue(exists(repset_fp),"Rep set doesn't exist.")
176
new_refseqs_fp = '%s/%d/new_refseqs.fna' % (self.wf_out,i)
177
self.assertTrue(exists(new_refseqs_fp),"New refseqs file doesn't exist.")
180
# spot check a few of the otus to confirm that we're getting reference and new
181
# otus in the final otu map
182
otu_table_fp = '%s/otu_table_mc2.biom' % self.wf_out
183
otu_table = parse_biom_table(open(otu_table_fp,'U'))
184
self.assertEqual(set(otu_table.SampleIds),
185
set(['PC.355','PC.481','PC.636','PC.354','PC.635',
186
'PC.593','PC.607','PC.356','PC.634','sample1']))
187
self.assertTrue('r102' in otu_table.ObservationIds,\
188
"Reference OTU (r102) is not in the final OTU table.")
189
# at least one reference and one cleanup otu from the first iteration are in the
190
# otu table - this may very rarely fail by chance
191
self.assertTrue(array([o.startswith('wf.test.otu.0.Reference')\
192
for o in otu_table.ObservationIds]).any())
193
self.assertTrue(array([o.startswith('wf.test.otu.0.CleanUp.Reference')\
194
for o in otu_table.ObservationIds]).any())
196
# At least one otu from the second iteration exists
197
self.assertTrue(array([o.startswith('wf.test.otu.1.Reference')\
198
for o in otu_table.ObservationIds]).any()
200
array([o.startswith('wf.test.otu.1.CleanUp.Reference')\
201
for o in otu_table.ObservationIds]).any())
203
# No singletons in the final OTU table
204
for row in otu_table.iterObservationData():
205
self.assertTrue(sum(row) >= 2,"Singleton OTU detected in OTU table.")
207
# number of otus in otu table equals sum of seqs in rep_set.fna
208
self.assertEqual(len(otu_table.ObservationIds),
209
count_seqs('%s/rep_set.fna' % self.wf_out)[0])
211
# confirm that tax/align/tree files exist
212
tree_fp = '%s/rep_set.tre' % self.wf_out
213
aln_fp = '%s/pynast_aligned_seqs/rep_set_aligned.fasta' % self.wf_out
214
self.assertTrue(exists(tree_fp))
215
self.assertTrue(exists(aln_fp))
216
num_tree_tips = len(LoadTree(tree_fp).tips())
217
num_align_seqs = LoadSeqs(aln_fp).getNumSeqs()
218
self.assertEqual(num_tree_tips,num_align_seqs)
219
self.assertTrue(num_tree_tips > 30)
220
# OTU table minus pynast failures has same number of otus as aligned
222
otu_table_fp = '%s/otu_table_mc2_w_tax_no_pynast_failures.biom' % self.wf_out
223
self.assertTrue(exists(otu_table_fp))
224
otu_table = parse_biom_table(open(otu_table_fp,'U'))
225
self.assertEqual(len(otu_table.ObservationIds),num_align_seqs)
227
def test_iterative_pick_subsampled_open_referenence_otus(self):
228
"""pick_subsampled_open_referenence_otus functions as expected with prefilter
230
iterative_pick_subsampled_open_referenence_otus(
231
input_fps=[self.fasting_seqs_fp1,self.fasting_seqs_fp2],
232
refseqs_fp=self.pick_ref_otus_refseqs2,
233
output_dir=self.wf_out,
234
percent_subsample=0.5,
235
new_ref_set_id='wf.test.otu',
236
command_handler=call_commands_serially,
237
params=parse_qiime_parameters([]),
238
qiime_config=self.qiime_config,
239
prefilter_percent_id=0.80,
240
step1_otu_map_fp=None,
241
step1_failures_fasta_fp=None,
243
suppress_step4=False,
245
status_update_callback=no_status_updates)
248
final_otu_map_fp = '%s/%d/final_otu_map.txt' % (self.wf_out,i)
249
final_failure_fp = '%s/%d/final_failures.txt' % (self.wf_out,i)
250
self.assertTrue(exists(final_otu_map_fp),"Final OTU map doesn't exist")
251
# No final failures file should be created
252
self.assertFalse(exists(final_failure_fp),\
253
"Final failures file shouldn't exist, but it does")
255
otu_table_fp = '%s/%d/otu_table_mc2.biom' % (self.wf_out,i)
256
self.assertTrue(exists(otu_table_fp),"OTU table doesn't exist.")
258
repset_fp = '%s/%d/rep_set.fna' % (self.wf_out,i)
259
self.assertTrue(exists(repset_fp),"Rep set doesn't exist.")
261
new_refseqs_fp = '%s/%d/new_refseqs.fna' % (self.wf_out,i)
262
self.assertTrue(exists(new_refseqs_fp),"New refseqs file doesn't exist.")
265
# spot check a few of the otus to confirm that we're getting reference and new
266
# otus in the final otu map
267
otu_table_fp = '%s/otu_table_mc2.biom' % self.wf_out
268
otu_table = parse_biom_table(open(otu_table_fp,'U'))
269
self.assertEqual(set(otu_table.SampleIds),
270
set(['PC.355','PC.481','PC.636','PC.354','PC.635',
271
'PC.593','PC.607','PC.356','PC.634']))
272
self.assertTrue('r102' in otu_table.ObservationIds,\
273
"Reference OTU (r102) is not in the final OTU table.")
274
# at least one reference and one cleanup otu from the first iteration are in the
275
# otu table - this may very rarely fail by chance
276
self.assertTrue(array([o.startswith('wf.test.otu.0.Reference')\
277
for o in otu_table.ObservationIds]).any())
278
self.assertTrue(array([o.startswith('wf.test.otu.0.CleanUp.Reference')\
279
for o in otu_table.ObservationIds]).any())
281
# One archael sequence from second iteration formed a new OTU
282
self.assertTrue(array([o.startswith('wf.test.otu.1.Reference')\
283
for o in otu_table.ObservationIds]).any()
285
array([o.startswith('wf.test.otu.1.CleanUp.Reference')\
286
for o in otu_table.ObservationIds]).any())
288
# No singletons in the final OTU table
289
for row in otu_table.iterObservationData():
290
self.assertTrue(sum(row) >= 2,"Singleton OTU detected in OTU table.")
292
# number of otus in otu table equals sum of seqs in rep_set.fna
293
self.assertEqual(len(otu_table.ObservationIds),
294
count_seqs('%s/rep_set.fna' % self.wf_out)[0])
296
# confirm that tax/align/tree files exist
297
tree_fp = '%s/rep_set.tre' % self.wf_out
298
aln_fp = '%s/pynast_aligned_seqs/rep_set_aligned.fasta' % self.wf_out
299
self.assertTrue(exists(tree_fp))
300
self.assertTrue(exists(aln_fp))
301
num_tree_tips = len(LoadTree(tree_fp).tips())
302
num_align_seqs = LoadSeqs(aln_fp).getNumSeqs()
303
self.assertEqual(num_tree_tips,num_align_seqs)
304
self.assertTrue(num_tree_tips > 30)
305
# OTU table minus pynast failures has same number of otus as aligned
307
otu_table_fp = '%s/otu_table_mc2_w_tax_no_pynast_failures.biom' % self.wf_out
308
self.assertTrue(exists(otu_table_fp))
309
otu_table = parse_biom_table(open(otu_table_fp,'U'))
310
self.assertEqual(len(otu_table.ObservationIds),num_align_seqs)
313
def test_iterative_pick_subsampled_open_referenence_otus_parallel(self):
314
"""pick_subsampled_open_referenence_otus functions as expected in parallel
316
iterative_pick_subsampled_open_referenence_otus(
317
input_fps=[self.fasting_seqs_fp1,self.fasting_seqs_fp2],
318
refseqs_fp=self.pick_ref_otus_refseqs2,
319
output_dir=self.wf_out,
320
percent_subsample=0.5,
321
new_ref_set_id='wf.test.otu',
322
command_handler=call_commands_serially,
323
params=parse_qiime_parameters([]),
324
qiime_config=self.qiime_config,
325
step1_otu_map_fp=None,
326
step1_failures_fasta_fp=None,
328
suppress_step4=False,
330
status_update_callback=no_status_updates)
333
final_otu_map_fp = '%s/%d/final_otu_map.txt' % (self.wf_out,i)
334
final_failure_fp = '%s/%d/final_failures.txt' % (self.wf_out,i)
335
self.assertTrue(exists(final_otu_map_fp),"Final OTU map doesn't exist")
336
# No final failures file should be created
337
self.assertFalse(exists(final_failure_fp),\
338
"Final failures file shouldn't exist, but it does")
340
otu_table_fp = '%s/%d/otu_table_mc2.biom' % (self.wf_out,i)
341
self.assertTrue(exists(otu_table_fp),"OTU table doesn't exist.")
343
repset_fp = '%s/%d/rep_set.fna' % (self.wf_out,i)
344
self.assertTrue(exists(repset_fp),"Rep set doesn't exist.")
346
new_refseqs_fp = '%s/%d/new_refseqs.fna' % (self.wf_out,i)
347
self.assertTrue(exists(new_refseqs_fp),"New refseqs file doesn't exist.")
350
# spot check a few of the otus to confirm that we're getting reference and new
351
# otus in the final otu map
352
otu_table_fp = '%s/otu_table_mc2.biom' % self.wf_out
353
otu_table = parse_biom_table(open(otu_table_fp,'U'))
354
self.assertEqual(set(otu_table.SampleIds),
355
set(['PC.355','PC.481','PC.636','PC.354','PC.635',
356
'PC.593','PC.607','PC.356','PC.634']))
357
self.assertTrue('r102' in otu_table.ObservationIds,\
358
"Reference OTU (r102) is not in the final OTU table.")
359
# at least one reference and one cleanup otu from the first iteration are in the
360
# otu table - this may very rarely fail by chance
361
self.assertTrue(array([o.startswith('wf.test.otu.0.Reference')\
362
for o in otu_table.ObservationIds]).any())
363
self.assertTrue(array([o.startswith('wf.test.otu.0.CleanUp.Reference')\
364
for o in otu_table.ObservationIds]).any())
366
# At least one otu from the second iteration exists
367
self.assertTrue(array([o.startswith('wf.test.otu.1.Reference')\
368
for o in otu_table.ObservationIds]).any()
370
array([o.startswith('wf.test.otu.1.CleanUp.Reference')\
371
for o in otu_table.ObservationIds]).any())
373
# No singletons in the final OTU table
374
for row in otu_table.iterObservationData():
375
self.assertTrue(sum(row) >= 2,"Singleton OTU detected in OTU table.")
377
# number of otus in otu table equals sum of seqs in rep_set.fna
378
self.assertEqual(len(otu_table.ObservationIds),
379
count_seqs('%s/rep_set.fna' % self.wf_out)[0])
381
# confirm that tax/align/tree files exist
382
tree_fp = '%s/rep_set.tre' % self.wf_out
383
aln_fp = '%s/pynast_aligned_seqs/rep_set_aligned.fasta' % self.wf_out
384
self.assertTrue(exists(tree_fp))
385
self.assertTrue(exists(aln_fp))
386
num_tree_tips = len(LoadTree(tree_fp).tips())
387
num_align_seqs = LoadSeqs(aln_fp).getNumSeqs()
388
self.assertEqual(num_tree_tips,num_align_seqs)
389
self.assertTrue(num_tree_tips > 30)
390
# OTU table minus pynast failures has same number of otus as aligned
392
otu_table_fp = '%s/otu_table_mc2_w_tax_no_pynast_failures.biom' % self.wf_out
393
self.assertTrue(exists(otu_table_fp))
394
otu_table = parse_biom_table(open(otu_table_fp,'U'))
395
self.assertEqual(len(otu_table.ObservationIds),num_align_seqs)
397
def test_pick_subsampled_open_referenence_otus(self):
398
"""pick_subsampled_open_referenence_otus functions as expected
400
pick_subsampled_open_referenence_otus(input_fp=self.fasting_seqs_fp1,
401
refseqs_fp=self.pick_ref_otus_refseqs2,
402
output_dir=self.wf_out,
403
percent_subsample=0.5,
404
new_ref_set_id='wf.test.otu',
405
command_handler=call_commands_serially,
406
params=parse_qiime_parameters([]),
407
qiime_config=self.qiime_config,
408
step1_otu_map_fp=None,
409
step1_failures_fasta_fp=None,
411
suppress_step4=False,
413
status_update_callback=no_status_updates)
414
final_otu_map_fp = '%s/final_otu_map.txt' % self.wf_out
415
final_failure_fp = '%s/final_failures.txt' % self.wf_out
416
final_repset_fp = '%s/rep_set.fna' % self.wf_out
417
new_refseqs_fp = '%s/new_refseqs.fna' % self.wf_out
419
self.assertTrue(exists(final_otu_map_fp),"Final OTU map doesn't exist")
420
self.assertFalse(exists(final_failure_fp),\
421
"Final failures file shouldn't exist, but it does")
422
self.assertTrue(exists(final_repset_fp),"Final representative set doesn't exist")
423
self.assertTrue(exists(new_refseqs_fp),"New refseqs file doesn't exist")
425
otu_table_fp = '%s/otu_table_mc2.biom' % self.wf_out
426
self.assertTrue(exists(otu_table_fp),"OTU table doesn't exist.")
427
otu_table = parse_biom_table(open(otu_table_fp,'U'))
428
for row in otu_table.iterObservationData():
429
self.assertTrue(sum(row) >= 2,"Singleton OTU detected in OTU table.")
430
self.assertEqual(len(otu_table.ObservationIds),count_seqs(final_repset_fp)[0])
432
# confirm that the new reference sequences is the same length as the
433
# input reference sequences plus the number of new non-singleton otus
434
self.assertEqual(count_seqs(new_refseqs_fp)[0],
435
count_seqs(self.pick_ref_otus_refseqs2)[0]+
436
len([o for o in otu_table.ObservationIds
437
if not o.startswith('r')]))
439
# spot check a few of the otus to confirm that we're getting reference and new
440
# otus in the final otu map. This is done on the OTU map singletons get filtered
441
# before building the otu table
442
final_otu_map = fields_to_dict(open(final_otu_map_fp))
443
self.assertTrue('r102' in final_otu_map,\
444
"Reference OTU (r102) is not in the final OTU map.")
445
self.assertTrue('wf.test.otu.ReferenceOTU5' in final_otu_map,\
446
"Failure OTU (wf.test.otu.ReferenceOTU5) is not in the final OTU map.")
447
self.assertTrue('wf.test.otu.CleanUp.ReferenceOTU1' in final_otu_map,\
448
"Failure OTU (wf.test.otu.CleanUp.ReferenceOTU1) is not in the final OTU map.")
450
# confirm that tax/align/tree files exist
451
tree_fp = '%s/rep_set.tre' % self.wf_out
452
aln_fp = '%s/pynast_aligned_seqs/rep_set_aligned.fasta' % self.wf_out
453
self.assertTrue(exists(tree_fp))
454
self.assertTrue(exists(aln_fp))
455
num_tree_tips = len(LoadTree(tree_fp).tips())
456
num_align_seqs = LoadSeqs(aln_fp).getNumSeqs()
457
self.assertEqual(num_tree_tips,num_align_seqs)
458
self.assertTrue(num_tree_tips > 30)
459
# OTU table minus pynast failures has same number of otus as aligned
461
otu_table_fp = '%s/otu_table_mc2_w_tax_no_pynast_failures.biom' % self.wf_out
462
self.assertTrue(exists(otu_table_fp))
463
otu_table = parse_biom_table(open(otu_table_fp,'U'))
464
self.assertEqual(len(otu_table.ObservationIds),num_align_seqs)
466
def test_pick_subsampled_open_referenence_otus_no_prefilter(self):
467
"""pick_subsampled_open_referenence_otus functions as expected without prefilter
469
pick_subsampled_open_referenence_otus(input_fp=self.fasting_seqs_fp1,
470
refseqs_fp=self.pick_ref_otus_refseqs2,
471
output_dir=self.wf_out,
472
percent_subsample=0.5,
473
new_ref_set_id='wf.test.otu',
474
command_handler=call_commands_serially,
475
params=parse_qiime_parameters([]),
476
qiime_config=self.qiime_config,
477
prefilter_percent_id=None,
478
step1_otu_map_fp=None,
479
step1_failures_fasta_fp=None,
481
suppress_step4=False,
483
status_update_callback=no_status_updates)
484
final_otu_map_fp = '%s/final_otu_map.txt' % self.wf_out
485
final_failure_fp = '%s/final_failures.txt' % self.wf_out
486
final_repset_fp = '%s/rep_set.fna' % self.wf_out
487
new_refseqs_fp = '%s/new_refseqs.fna' % self.wf_out
489
self.assertTrue(exists(final_otu_map_fp),"Final OTU map doesn't exist")
490
self.assertFalse(exists(final_failure_fp),\
491
"Final failures file shouldn't exist, but it does")
492
self.assertTrue(exists(final_repset_fp),"Final representative set doesn't exist")
493
self.assertTrue(exists(new_refseqs_fp),"New refseqs file doesn't exist")
495
otu_table_fp = '%s/otu_table_mc2.biom' % self.wf_out
496
self.assertTrue(exists(otu_table_fp),"OTU table doesn't exist.")
497
otu_table = parse_biom_table(open(otu_table_fp,'U'))
498
for row in otu_table.iterObservationData():
499
self.assertTrue(sum(row) >= 2,"Singleton OTU detected in OTU table.")
500
self.assertEqual(len(otu_table.ObservationIds),count_seqs(final_repset_fp)[0])
502
# confirm that the new reference sequences is the same length as the
503
# input reference sequences plus the number of new non-singleton otus
504
self.assertEqual(count_seqs(new_refseqs_fp)[0],
505
count_seqs(self.pick_ref_otus_refseqs2)[0]+
506
len([o for o in otu_table.ObservationIds
507
if not o.startswith('r')]))
509
# spot check a few of the otus to confirm that we're getting reference and new
510
# otus in the final otu map. This is done on the OTU map singletons get filtered
511
# before building the otu table
512
final_otu_map = fields_to_dict(open(final_otu_map_fp))
513
self.assertTrue('r102' in final_otu_map,\
514
"Reference OTU (r102) is not in the final OTU map.")
515
self.assertTrue('wf.test.otu.ReferenceOTU5' in final_otu_map,\
516
"Failure OTU (wf.test.otu.ReferenceOTU5) is not in the final OTU map.")
517
self.assertTrue('wf.test.otu.CleanUp.ReferenceOTU1' in final_otu_map,\
518
"Failure OTU (wf.test.otu.CleanUp.ReferenceOTU1) is not in the final OTU map.")
521
def test_pick_subsampled_open_referenence_otus_parallel(self):
522
"""pick_subsampled_open_referenence_otus functions as expected
524
pick_subsampled_open_referenence_otus(input_fp=self.fasting_seqs_fp1,
525
refseqs_fp=self.pick_ref_otus_refseqs2,
526
output_dir=self.wf_out,
527
percent_subsample=0.5,
528
new_ref_set_id='wf.test.otu',
529
command_handler=call_commands_serially,
530
params=parse_qiime_parameters([]),
531
qiime_config=self.qiime_config,
532
step1_otu_map_fp=None,
533
step1_failures_fasta_fp=None,
535
suppress_step4=False,
537
status_update_callback=no_status_updates)
538
final_otu_map_fp = '%s/final_otu_map.txt' % self.wf_out
539
final_failure_fp = '%s/final_failures.txt' % self.wf_out
540
final_repset_fp = '%s/rep_set.fna' % self.wf_out
541
new_refseqs_fp = '%s/new_refseqs.fna' % self.wf_out
543
self.assertTrue(exists(final_otu_map_fp),"Final OTU map doesn't exist")
544
self.assertFalse(exists(final_failure_fp),\
545
"Final failures file shouldn't exist, but it does")
546
self.assertTrue(exists(final_repset_fp),"Final representative set doesn't exist")
547
self.assertTrue(exists(new_refseqs_fp),"New refseqs file doesn't exist")
549
otu_table_fp = '%s/otu_table_mc2.biom' % self.wf_out
550
self.assertTrue(exists(otu_table_fp),"OTU table doesn't exist.")
551
otu_table = parse_biom_table(open(otu_table_fp,'U'))
552
for row in otu_table.iterObservationData():
553
self.assertTrue(sum(row) >= 2,"Singleton OTU detected in OTU table.")
554
self.assertEqual(len(otu_table.ObservationIds),count_seqs(final_repset_fp)[0])
556
# confirm that the new reference sequences is the same length as the
557
# input reference sequences plus the number of new non-singleton otus
558
self.assertEqual(count_seqs(new_refseqs_fp)[0],
559
count_seqs(self.pick_ref_otus_refseqs2)[0]+
560
len([o for o in otu_table.ObservationIds if not o.startswith('r')]))
562
# spot check a few of the otus to confirm that we're getting reference and new
563
# otus in the final otu map. This is done on the OTU map singletons get filtered
564
# before building the otu table
565
final_otu_map = fields_to_dict(open(final_otu_map_fp))
566
self.assertTrue('r102' in final_otu_map,\
567
"Reference OTU (r102) is not in the final OTU map.")
568
self.assertTrue('wf.test.otu.ReferenceOTU5' in final_otu_map,\
569
"Failure OTU (wf.test.otu.ReferenceOTU5) is not in the final OTU map.")
570
self.assertTrue('wf.test.otu.CleanUp.ReferenceOTU1' in final_otu_map,\
571
"Failure OTU (wf.test.otu.CleanUp.ReferenceOTU1) is not in the final OTU map.")
573
# confirm that tax/align/tree files exist
574
tree_fp = '%s/rep_set.tre' % self.wf_out
575
aln_fp = '%s/pynast_aligned_seqs/rep_set_aligned.fasta' % self.wf_out
576
self.assertTrue(exists(tree_fp))
577
self.assertTrue(exists(aln_fp))
578
num_tree_tips = len(LoadTree(tree_fp).tips())
579
num_align_seqs = LoadSeqs(aln_fp).getNumSeqs()
580
self.assertEqual(num_tree_tips,num_align_seqs)
581
self.assertTrue(num_tree_tips > 30)
582
# OTU table minus pynast failures has same number of otus as aligned
584
otu_table_fp = '%s/otu_table_mc2_w_tax_no_pynast_failures.biom' % self.wf_out
585
self.assertTrue(exists(otu_table_fp))
586
otu_table = parse_biom_table(open(otu_table_fp,'U'))
587
self.assertEqual(len(otu_table.ObservationIds),num_align_seqs)
590
def test_pick_subsampled_open_referenence_otus_suppress_step4(self):
591
"""pick_subsampled_open_referenence_otus functions as expected wo step 4
593
pick_subsampled_open_referenence_otus(input_fp=self.fasting_seqs_fp1,
594
refseqs_fp=self.pick_ref_otus_refseqs2,
595
output_dir=self.wf_out,
596
percent_subsample=0.5,
597
new_ref_set_id='wf.test.otu',
598
command_handler=call_commands_serially,
599
params=parse_qiime_parameters([]),
600
qiime_config=self.qiime_config,
601
step1_otu_map_fp=None,
602
step1_failures_fasta_fp=None,
606
status_update_callback=no_status_updates)
607
final_otu_map_fp = '%s/final_otu_map.txt' % self.wf_out
608
final_failure_fp = '%s/final_failures.txt' % self.wf_out
609
final_repset_fp = '%s/rep_set.fna' % self.wf_out
610
new_refseqs_fp = '%s/new_refseqs.fna' % self.wf_out
612
self.assertTrue(exists(final_otu_map_fp),"Final OTU map doesn't exist")
613
self.assertTrue(exists(final_failure_fp),"Final failures file doesn't exist")
614
self.assertTrue(exists(final_repset_fp),"Final representative set doesn't exist")
615
self.assertTrue(exists(new_refseqs_fp),"New refseqs file doesn't exist")
617
otu_table_fp = '%s/otu_table_mc2.biom' % self.wf_out
618
self.assertTrue(exists(otu_table_fp),"OTU table doesn't exist.")
619
otu_table = parse_biom_table(open(otu_table_fp,'U'))
620
for row in otu_table.iterObservationData():
621
self.assertTrue(sum(row) >= 2,"Singleton OTU detected in OTU table.")
622
self.assertEqual(len(otu_table.ObservationIds),count_seqs(final_repset_fp)[0])
624
# confirm that the new reference sequences is the same length as the
625
# input reference sequences plus the number of new non-singleton otus
626
self.assertEqual(count_seqs(new_refseqs_fp)[0],
627
count_seqs(self.pick_ref_otus_refseqs2)[0]+
628
len([o for o in otu_table.ObservationIds if not o.startswith('r')]))
630
# spot check a few of the otus to confirm that we're getting reference and new
631
# otus in the final otu map. This is done on the OTU map singletons get filtered
632
# before building the otu table
633
final_otu_map = fields_to_dict(open(final_otu_map_fp))
634
self.assertTrue('r102' in final_otu_map,\
635
"Reference OTU (r102) is not in the final OTU map.")
636
self.assertTrue('wf.test.otu.ReferenceOTU5' in final_otu_map,\
637
"Failure OTU (wf.test.otu.ReferenceOTU5) is not in the final OTU map.")
638
self.assertFalse('wf.test.otu.CleanUp.ReferenceOTU1' in final_otu_map,\
639
"Step4 (clean-up) OTUs are present in the final OTU map but shouldn't be.")
641
def test_pick_subsampled_open_referenence_otus_parallel_suppress_step4(self):
642
"""pick_subsampled_open_referenence_otus functions as expected in parallel wo step4
644
pick_subsampled_open_referenence_otus(input_fp=self.fasting_seqs_fp1,
645
refseqs_fp=self.pick_ref_otus_refseqs2,
646
output_dir=self.wf_out,
647
percent_subsample=0.5,
648
new_ref_set_id='wf.test.otu',
649
command_handler=call_commands_serially,
650
params=parse_qiime_parameters([]),
651
qiime_config=self.qiime_config,
652
step1_otu_map_fp=None,
653
step1_failures_fasta_fp=None,
657
status_update_callback=no_status_updates)
658
final_otu_map_fp = '%s/final_otu_map.txt' % self.wf_out
659
final_failure_fp = '%s/final_failures.txt' % self.wf_out
660
final_repset_fp = '%s/rep_set.fna' % self.wf_out
661
new_refseqs_fp = '%s/new_refseqs.fna' % self.wf_out
663
self.assertTrue(exists(final_otu_map_fp),"Final OTU map doesn't exist")
664
self.assertTrue(exists(final_failure_fp),"Final failures file doesn't exist")
665
self.assertTrue(exists(final_repset_fp),"Final representative set doesn't exist")
666
self.assertTrue(exists(new_refseqs_fp),"New refseqs file doesn't exist")
668
otu_table_fp = '%s/otu_table_mc2.biom' % self.wf_out
669
self.assertTrue(exists(otu_table_fp),"OTU table doesn't exist.")
670
otu_table = parse_biom_table(open(otu_table_fp,'U'))
671
for row in otu_table.iterObservationData():
672
self.assertTrue(sum(row) >= 2,"Singleton OTU detected in OTU table.")
673
self.assertEqual(len(otu_table.ObservationIds),count_seqs(final_repset_fp)[0])
675
# confirm that the new reference sequences is the same length as the
676
# input reference sequences plus the number of new non-singleton otus
677
self.assertEqual(count_seqs(new_refseqs_fp)[0],
678
count_seqs(self.pick_ref_otus_refseqs2)[0]+
679
len([o for o in otu_table.ObservationIds if not o.startswith('r')]))
681
# spot check a few of the otus to confirm that we're getting reference and new
682
# otus in the final otu map. This is done on the OTU map singletons get filtered
683
# before building the otu table
684
final_otu_map = fields_to_dict(open(final_otu_map_fp))
685
self.assertTrue('r102' in final_otu_map,\
686
"Reference OTU (r102) is not in the final OTU map.")
687
self.assertTrue('wf.test.otu.ReferenceOTU5' in final_otu_map,\
688
"Failure OTU (wf.test.otu.ReferenceOTU5) is not in the final OTU map.")
689
self.assertFalse('wf.test.otu.CleanUp.ReferenceOTU1' in final_otu_map,\
690
"Step4 (clean-up) OTUs are present in the final OTU map but shouldn't be.")
692
subsample_otus_seqs = """>sample1_1 r0
693
TTGGACCGTGTCTCAGTTCCAATGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTATCCATCGTTGACTTGGTGGGCCGTTACCCCGCCAACTATCTAATGGAACGCATCCCCATCGATAACCGAAATTCTTTAATAGTGAAACCATGCGGAAATACTATACTATCGGGTATTAATCTTTCTTTCGAAAGGCTATCCCCGAGTTATCGGCAGGTTGGATACGTGTTACTCACCCGTGCGCCGGTCGCCATCAA
695
CTGGGCCGTGTCTCAGTACCAGTGTGGGGGACCTTCCTCTCAGAACCCCTACGCATCGTCGGCTTGGTGGTCCGTTACACCGCCAACTACCTAATGCGACGCATGCCCATCCGCTACCGGATCGCTCCTTTGGAATCCCGGGGATGTCCCCGGAACTCGTTATGCGGTATTAGACGGAATTTCTTCCGCTTATCCCCCTGTAGCGGGCAGGTTGCATACGTGTTACTCACCCGTCCGCCACTAGGGCG
696
>PC.607_2 hits new otu
697
CTGGGCCGTATCTCAGTCCCAATGTGGCCGTTCAACCTCTCAGTCCGGCTACTGATCGTCGCCTTGGTAGGCCGTTGCCCCGCCAACTACCTAATCGGACGCGAGCCCATCTTTCAGCGGATTGCTCCTTTGATTATCTCACCATGCGGCAAAATAATGTCATGCGGTATTAGCGTTCGTTTCCAAACGTTATCCCCCTCTGAAAGGCAGGTTGCTCACGCGTT
698
>PC.607_1000 85% id to r100
699
GCCGTCAGTTCGTGCCGTAAGGTGTTCTGTTAAGTCAGATAACGAACGAGACCCATGCCATTAGTTGCTATCTGTTCCTTCGGGGACAGAGCACTCTAATGGGACCGCTGCTGCTAAAGCAGAGGAAGGTGTGGGCAACGGTAGGTCAGTATGCCCCGAATCTCCCGGGCTACACGCGGACTACAATGGTTGAAACAATGGGCTGCTACGCCGAGAGGCGACCGGTCTGTACGGTAAGGTTACCTATACGCT
700
>PC.607_1001 85% id to r100
701
GCCGTCAGTTCGTGCCGTAAGGTGTTCTGTTAAGTCAGATAACGAACGAGACCCATGCCATTAGTTGCTATCTGTTCCTTCGGGGACAGAGCACTCTAATGGGACCGCTGCTGCTAAAGCAGAGGAAGGTGTGGGCAACGGTAGGTCAGTATGCCCCGAATCTCCCGGGCTACACGCGGACTACAATGGTTGAAACAATGGGCTGCTACGCCGAGAGGCGACCGGTCTGTACGGTAAGGTTACCTATACGCT
702
>PC.607_1002 85% id to r100
703
GCCGTCAGTTCGTGCCGTAAGGTGTTCTGTTAAGTCAGATAACGAACGAGACCCATGCCATTAGTTGCTATCTGTTCCTTCGGGGACAGAGCACTCTAATGGGACCGCTGCTGCTAAAGCAGAGGAAGGTGTGGGCAACGGTAGGTCAGTATGCCCCGAATCTCCCGGGCTACACGCGGACTACAATGGTTGAAACAATGGGCTGCTACGCCGAGAGGCGACCGGTCTGTACGGTAAGGTTACCTATACGCT
704
>PC.607_1003 85% id to r100
705
GCCGTCAGTTCGTGCCGTAAGGTGTTCTGTTAAGTCAGATAACGAACGAGACCCATGCCATTAGTTGCTATCTGTTCCTTCGGGGACAGAGCACTCTAATGGGACCGCTGCTGCTAAAGCAGAGGAAGGTGTGGGCAACGGTAGGTCAGTATGCCCCGAATCTCCCGGGCTACACGCGGACTACAATGGTTGAAACAATGGGCTGCTACGCCGAGAGGCGACCGGTCTGTACGGTAAGGTTACCTATACGCT
706
>PC.607_1004 85% id to r100
707
GCCGTCAGTTCGTGCCGTAAGGTGTTCTGTTAAGTCAGATAACGAACGAGACCCATGCCATTAGTTGCTATCTGTTCCTTCGGGGACAGAGCACTCTAATGGGACCGCTGCTGCTAAAGCAGAGGAAGGTGTGGGCAACGGTAGGTCAGTATGCCCCGAATCTCCCGGGCTACACGCGGACTACAATGGTTGAAACAATGGGCTGCTACGCCGAGAGGCGACCGGTCTGTACGGTAAGGTTACCTATACGCT
708
>sample1_100 random sequence
709
AGCGGATGACCGTGAAGCGTATGACGTATCCTAACAGACCCTCATAACAGGGTGAATTTGATACGTCCTCAGTCGCAAATAGCCCAAGGTCTCCTCACTGGCGAATCTGCAAGGCCGTTCCGGGCGGCTCCTTGGTTTAAGCCGCCGGAGGCCCCCACTAATAAGTGTGATAATTTGAACTATAAGCGGACGTGTTGTGCAGCGTTACATCAGAAGTGTTTGATCGGGTAGACGCTCCCGGAAGTCACGG
710
>sample1_101 random sequence
711
TATGGGCCACAAGGTCACATGGCTCCTGCAATGCTCGAAGATAACGTTGGGAAGCAATTGCCAGAAGTAGCTCAGTGTGGGCATTTCGTTAAGTTGCCCGTGGTTATGCAAGTTGTTAGCTCCAGAATACAGTTAGCGGGGAGAATCTGGAAGTAAACACGTTAGTTGGCCGAAATGGGGCTCTTGAGTTCGCAAACTAAGTAATATCTTAGGAATGGGCGGCTGACATCGAGATTTTATTTTCAGGATA
712
>sample1_102 random sequence
713
CATCGCTCAGTATCTCCCTTATCCCCAGGCAAGCGAGCATACGGGCCCCGACGTCCTGTTTCAGTTGATGTGTGTTCACTGCCATATGAGGCTTGTCCCACCGGAGCGTGCAAATTACGTTAGCCAAACGGAATCGCGTGACAGGAGGGGCAGATCTCTGGCCCATCGGCCTTATTCAACGGGGTTAAACCTCCTTTCAGCACACCGTCTGAGCTAGGCGCACGACCTATGTAAGCGGATTAGGGGATCG
714
>sample1_103 random sequence
715
TTGACCTACACGGACTTTACTCGCGCATGTCTGCACCCAAGGGACCAAAGCGTTGTAGCTAGACGCCTCCTCTACCTATTCGAATATTGCTACACCCAAAATCTTCCATTCGTTCGAGGCACATGCGAGTGGCAACTCGGAGGATAGAGGTGCCTTATGAGGGTCATTTTGCTTGCAGCTCTTGCCTGGATGCCACCCAGCCCGGCTATAACATGAAAACTGTACGCCCCCAAAGTGTCAATATATGTGG
716
>sample1_104 random sequence
717
TAGTAATTGAGTAGGGCACTGGCAAAACCGACTCCACGCCCCGGATCTCATCGCACTATGCACTGGCAATTGCTGGCTGTTTTCGATATGTTTACTTTGGAACTCCTGAGGCAGTCCTGGTACCGAAGTGTCGGACTCCCAAGATGTCTTTACATAGAGTCAGCAAGACGGAGCTACGCTACATGTAACGGGGCCCGCTGTAATCCCTCCCCCAGAATCGTCGGCGCGGCTGATTAACGTCCTCACTCGA
718
>sample1_105 random sequence
719
ATATAGAACCGCGCGTTCTAAGTGCGTGCACTTAAGTGACGATTCATGGCATGTCCTGAGCTTGCCACCGCGCTTCCAGGCGTAGTCTCAGTAGCTTGACTGTACTTTGCGGGCGCAGAGGTCCCCAGTGCCAAGCCTCAAGTGTTCTGAATTACCCCACCGATCTTTAGCGTAGGTCCCGCACTCGCATATCGTAGAGCGACTCGTAGTAAAAGGGGTAGGCTTTAATAGAACACCTTTAGCAATAGCG
720
>sample1_106 random sequence
721
CCCGCACCAGATCACGAGTATCCACTCGGTCACACTGCGAGGCAATCTGTGTCAAAGGTCCACTGTAAGTATGAAATGTCCCCGTTCTCGTTAGATCCGGTAGGCATCAGAAGATCACTGGATCTACCCGAACTGTATGTCACGGTCATATAAGCGACTAAATGATCCTGCGGACACGTGCAACGAGCACGGTGATGGATGGGGAATACAGCACCGAATCATGATATCTCTTGGCGTACGTAACATAGTC
722
>sample1_107 random sequence
723
CTTGGAGCCTATAAGGATAGGAACAGCCCTAATAAGAATGAGTGCCGAACACATTGTGCAGGGCTATTGTTAGTATCGCACCCGGAGGGGAGCCTGAAATGCAAACTGGCCTCGACATCTGGATATCGCACAGACCCCCGCAGTGATTTCACGGTAGACAGTAAAGCGTTAGACACAGCGTCCGGATTCGGACTAAGTTCCCCTCAGTTTAGTTGGATCTTATTCCTATGACGCGACCTCCACTGCTCAG
724
>sample1_108 random sequence
725
GAGTAGCTATAACTCCGCGCGTTGTCTGAGCAATAAAAAGCAACTTTATTTTCGTAGCACGGGCTATCCGAACCAGCGTAATGGACTCATGGCCTAGCAGATGGGACAAAAGTAGCTCCCTGCGCCCAGCTGTATGGGTAGGACGTACAGGAGGAATTTGATTTTATCCGGCTAACTTCCGAGAAGTCGTCTAGGCGCGTTCCATATAGGATACTCGCGGTTTGCTCACGAGGTACCAACCGTTACCAAG
726
>sample1_109 random sequence
727
AAGTGTGTTTCCCGTCGCATGGGATTTGGCTAGTCCTGGTTTGTTCGTCCGTGTAGAAGTCATAATTATTTAAAAGCAGCTTTTCCTAAGTGAGTTTTTGTCGTGCTGACACATATCCAGGGAGAGCGCCTGTATGCGTGATAGACTACCAAACAATGTCACCCAATCCATACACAATGGTGCTAGAGACTCAGGACAGGTCGTATGCCATGAGGCCATTCTGCCTTCAGGTCCAGGGATCCCTTATCGG
728
>sample1_110 random sequence
729
CCTTATTCTTACCTCCCACGGACGCCACAATTAGCCAAGTCACCCGTACCTAATGGTTCCGAAAGGAGAAGCCTGCCTCACGTGGACCCAACCGCCCTGACATACGGAACAAGCTTCAGGTAAGCCGGATGATACATAATGCCCCTAGGATATAGTAGACTTGCGTCGGCAGTAGCTGCCACGTCTCACTTCGTGATAAGAGAGCATCAAATCAATTTCACCGACCGATTTCGCCCGGGACTATGCGGTA
730
>sample1_111 random sequence
731
CCACACTGAGGCCAGGTCGGTTACACCTTAAATTCTAACGCCTGATAGGTTACTTGGGGTTGCCCTTTGCAGGCGCCTAAAAGATACGATGGAAGACGAGCGTAGGACGGCCGAACACAGGCCTTCGAAACTTAATACCAAATGAGGGACGGAGGGAGCAGCTCTTCGTCGAGTACAGCGCTACGACCGGCATAGAATAACGACTACACTTTTCCAACTGAAAAGATAGCTTAGAGAAGGTTTGCGAGGT
732
>sample1_112 random sequence
733
CCTTGACGTATCCCAAAGACCACTTGGTGTTGCCCTACACGGGCAAACGGTTGGTTAAATAGCACGCTCCAGTGAAGGGCTTTCGTATGACCGCGCGCGCCGACCTCGTACACGTTATCGGAGCCGTCTAGTTCTGTCCAGGTCCCATCGTCCTGCCGAGTTATGAGATAATGAGTAGTACACGAGGGCACCGATCTGAAGCGTTGCTTATATAATAACGGCGGGTGTTAATGAGTGAACACCTAGAACT
734
>sample1_113 random sequence
735
TAGTACAGGCCCTATGCCCAACATCACCCGCCAGTGTGCCGCTACTTTGTACTGGATCATTTATTTTCGATCGAGACCGGGTCTAATCGCTGGCGGGATGGTTAGAATTGGATTTGATTTGCCTACATATATGACCAGAGTGCCGTTGAGGAGGAGGATGGACACGCCGGACCTTCTCGAAGTGTTGTTTGCTCGACATACTAGGCGTTCTTGTTGTATGGTTCCCCCTGATAACACCATGGTCGCGATT
736
>sample1_114 random sequence
737
CCCTAAGATTAACCCTGGGAGGGTTTGAACTAGCGCCGGTCTACTACGGTGAATTCCTAAAGTCGAACTATATAGTATCGGTGACTTGACAGGAGAAGGCCCAGCTAGAGGTAGTGTTTGCTAGAGAGGGGCCGGGAAAACCAGCATAACACAATTAACGACAAGCATATTGATCGTATAGCTTGGAAGGAAATATCCTGGAACCGCATCGTGGTAAAACTCCGGTAGCGAACCGCAGAGAGCTTTTGGG
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AATTCTTTTTATTTGGAGGCTCTGACCTCTTCGAGGCACCTCTTGAGCGCCTTCAGGTTTGCTAAAAGTTAGTCGTTAGTCCGGAATCCCACCATCAGAGGTAGTAATATCTTTTAGACTACGGCTTCACATAGTGTCGCTCCATTGGTGTGCCTCGGTGGCCACTGAGAACTCGGCCTGCAGGACTCACTGCTTCGGCAATTATAATCGACGTCTGAGCGCTATCAAAGCGGAGCTGACGAAAGTTGGG
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GGCTCGTGATCCTATAATAGACGTATGCGGTAGGAAGTTGGTCCATAGAAGGTTCACGCGGGTGTGGCCCCGACGTAGGGATATACTTTTTGAGTCAGAGGAAGCGAATGTTCACTCGAGCTTGATCTACGACCATTCTACGTTGTTAGAGTCCTCCAGATCTCTAAATGAGTGCCTGGTCAACGTTTCACTCACTCACTTCTTCCATAAGAATCTGTCCAATCGGAATGGATCAACCCAGACTTGTGCT
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AGGAGCCCGCTAGTGTGACCGGATAAAACGATTCATAGTCGGATTGGGAATTGCATTTGAGTGTGCCCGAACAAGATAGATAGCTACTTACCCAGTTCCCGCTGACACGAGGGTCCTGTCAGCTAACTCCGTTGGGAAGCCCCAGACATCCCTGTGGTCCCATACACGTATTAGGCTCCAAGTGCACGCCGTCAATGTTATTGATCAGTGATATTCCCCTTTGGGGCACCTGGCCGTTCAGAAGCATCGG
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AAACGGTACTATGCAAATCAATGACCGGATTGAGCAGGTCAAGCTTAATATCCCCCGCATGAAACGCATACATTACACACACGGAGACATGTCTCCCTCTCAACCAGTCACGTCTGAAAGTTTGTCCCGATTGACCGGCGCCCTAAACCGCGCACATTAGTGAGACCGTCCCCTACCACCCACCGCGACTTAACAGATCTAGGCAGGGCCGAACTGACCTTCCGGGGTGTTTTCTGTAATCGGCAACCGC
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CACGTCGAGTCTGATGCGCGGATAGGTTTCAAAGCTTAGGATAATATATAGTCGAACCTTAATGATGGAACTGCCGAGTTTTTAAGACTTGTAGACATAACGGAATTCGCCGGTATGACGGATGACGCGTCTGCTCCAGCTGTAGTATTTTGACATCGAAGCTTCCAGTGTGGACACAGGTGAGTGTACGTAGCCGTGCACCCTTTCGACTTTAGACCCCGATAATTGGGGACCCTGTAAACGAAGCCCC
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CTCATGCGCACCTCGCATTTCAACAATACATCGAATAGGCTCCGGTCTAGGTGATCATACTGGGGGGCCAGTCGTCCGGAGTGGGCCAGGGCTTAATAACACTCTGTTGTCTCGACTAGATGTGGCTGGACAGTCGACCAAGACGTACTACACCCATGTTATCGGCCAAAGCTGTACTTTAACTAAAATGACCCCTTAATTCCTGTTCCGACACAGGCTTACACCAGGAGATTGTCTTTCTTGGACGCAA
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AACGCGATCTGGGCGTTGCCGTATTTTATCTTGCCGTAAGGTCCTTCACGCCCGCACATGGCATTGGTCGATCGGGGTGAGTATTGACCAAACCTGTCGCTAGATATGGATGTAAGTTTGGGTCGTTCTCAGGCTAGATCGTATACAGGGAGGATAGAGTAGATGGGGCCGAACGCCGAGCTGGCTCGACTATAGGGGCGACGCGTGCGAAGGGGGAAAGCGCGTTAGTACACCCCGCCGATAGGGTGGC
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TGTTGGTAATGCGCAAGCAAAGATACAAGCCGAGTAGCCCTTGTTACAAGGGGGACTGGCATTTCGGACTCATCCGAGAAGAGGGGCTGCAGACATTCTACGGGCCAGGGTCTACACGGTCCTTGGTGTATGTGCGCGGCGGAAAGTTGCTAACGACTCCAGTTAGCTGTAGGGTCTGTCTGTCATATGCATAGTCGCGTCTGATTGTGCTCTCATTTTCTAGAGACAAGCGTTTGGTTACTATGCCAGG
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ACTCGCGCGATGACTGACCCTGACTGAAAAGAGTCCGATGGTAACCCCATGGCGATCATGGGTAGTACTACGAGTAAGGCCACACGAAAGAGACGCGGTGGCAACCTGCGTCCGCTTTCTGAATGCTAACTTCTTCAGATATTGTCTGAGTTAACTGGTGTGTGTAAAGTTGCCGAGGCTGGGCCCAAACAGCAGCGGGAGAGTTTGTCTACGAAGTTGGGTAGGTGGCACCGTGTGACGCTTACATAGT
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TTCTAGCTGGCGAGATCCAAACGGACTCATGTAGGCATACGTGGGTCGTAGTATTCCTTTTGTGATGGCAGCGTGGCTCAACACTTGGTGGGCGCCGTAACTCTAGGTCGCCACGGCTTTATTTTATGAACGCCTAGCGATGTGAGTATCTCTGGGACAATGAACGACGTAGTTCCATTGGAATCCCAAAGCAAGTGGTAAGGGGAGCCTTCCGCCTCGACACTCTTACGTATAAAAGTCTTCATGTTCA
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AGACACCTCACTGTTCGAAAGGGAGACGTGATGTCGCAAAGTTTAATTGAGTGCATCACCAATTGCTATAGCGATGTCTGTTCAGTATGGGGTGATCAGAATCTGTATAGAATTTTCGCTGCTCTCAGATACCTCCTACTCACATTATGAGCTCCTGGACCGCCGATAGACCTTAACAGGGGTCGAGGCATCCAAACGGCCCTTCAGGAGCCACGCCGGAGCATCGTCAGTGCAAGAATTGGTGACGTGC
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GTTCCTAGCTAGCCAAGTGGCTTGGTGGGTAGAGGGCCACCCATACCACAATTCACTTATGAAGGCCAGCTATCCAGACGCGTTCCCGTAGTTGTATATTATCGTAGCTTGCTTTCCAAATGCTTATCTAATCAATTAGGGAGTGGGCTTAGGTCACGCATTTAAGTTAATATGGGACAGTGGTCCTTGTAATAGAACGAACGGACCATGGTCAGCTTTGCTTAGCCAACATAAGAACATAAACGCACGC
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ATGGACAAATGACCAGCACCACATAGCAAGGGTCGTAGCAGTTTCGGGTGGGCGTGGATAGTCACGGCCAGTCAAAGGTGGGGGCCTTGCATAAATCTTCAGCCGTAGCGCGGGCTGTTGTAAGGTCTTGGCTACAAAAGCGTAAAAGTAAGAAACACATGACAATACCCCGCTGCGATACCTGCCCATCTATTCGAGTAGAGATTCAGCGGATTTCTAAACGGTAGGGAGTCGGAGTTGTAACAGGCAA
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CAACTCTCTCTTATGGTTGGGGTGTTCCTTGGCGAAGTCAGCTCTTACGGTCCCGACAGCTAACGGTAACTGGCTGCCTATATGCAAGGCGTACTCCATTACCTTATCCCGAAGCACGCACGCATAAACTTCCGCTTCGTGCTTGGTAAAGAATGACGGCATCTTGGTCACATTTGTGCAACCGGTTCTTTAGTTATCGGTTGCGCGATATATATCTCACTGATTCTAGTGTTAATACTCTGTACCCTAT
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ACCGAGCTAGCTCTAATTTAGAAAGACCGACAACAACACTCGGTGTTTCACAAAAATAAGTCATCAATTAAGAAACGCCGAAATCATCAGAAACAATGCTTGAATAGTTGTGCAGATGTGAAACCCGGGTCCTGGAAAGTGTCATGAGGAATGGTGGTGTGCCGAGGGACTGCTGGTTAATATATGGAGCCTCGCCGTCCTGGCGCTGCGTATCTAGCCAGGCGAGAGGGTCGCCTGGTTCAAAGATATC
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TAAAGGTTCGGCGCGGGAGGAGACTCGCCTGGGTTGCAGGTACCATGGTTGCCTCTTTTACAGCTTATCAGATAAGGTGGACAGTGTGTGTGGCACAACGTGACTAGAAGAACATCTGTACTACACAGCCTTCATCCTTTATGAGTGCACCAACAAAGCTCCCCGAACTGCTTGAAGCCATTGACGGTCAGACGACCAATCGAACGAGGTGATTCGAACGTACACCACTCCGACCCCACCTCACCTTACA
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AAGCCAGACGGCTCAAATATAAATATAGCCTCTAGCACCTTTCTGCCGGCAGCGACACCGTCACGCCGGGAAGCGGAAACATAATTACTACGAGATCTCGAAGCCAATCCGTTATTCATCCCTGGCGATCGACGCATCTATTCACGGATCGATACAAAGGCTATTGAGAAACCACAGCCGCGAGGACCGCCGACCTCCGTGCTGTCTCAATTACTAATTTAGATCCATGCGCCTATTTCAATGTGGCTAT
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1821
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1829
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1835
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1903
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1905
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1955
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1971
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1973
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1975
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1977
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1979
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1981
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1983
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1985
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1987
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1989
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1991
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1993
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1995
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1997
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1999
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2001
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2003
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2005
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2007
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2009
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2011
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2013
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2015
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2017
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2019
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2021
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2023
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2025
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2027
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2029
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2031
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2033
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2035
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2037
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2039
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2041
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2043
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2045
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2047
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2049
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2051
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2053
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2055
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2057
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2059
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2061
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2063
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2065
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2101
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2108
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